2.乳酸杆菌的抑菌作用：6Ka好牙网

　　根据国际科学协会对益生菌的官方定义：在宿主体内以充足的数量存活并对宿主有利的细菌，最常见的包括口腔内的LB和双歧杆菌。LB是一种普遍的益生菌，广泛存在于人类胃肠道、泌尿生殖系统，在调节局部微生物生态平衡中有重要地位。Caglar和Hatakka等研究表明，一些LB例如罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌产生的益生素或H2O2、抗真菌多肽能抑制其他口腔致病菌例如S.mutans以及念珠菌的生长。Ahola和Chuang等研究表明，口腔中的某些乳杆菌能降低口腔中S.mutans的水平。6Ka好牙网

　　2015年Sidhu等研究发现，儿童长期摄入一定量的益生菌可以明显降低口内S.mutans的水平。益生菌例如双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌产生的益生素可以抑制口腔内致病菌的生长，从而抑制龋病、牙周病、口腔黏膜病的发展，但早期的研究并未阐明其具体机制。6Ka好牙网

　　四、鉴定口腔内乳酸杆菌种类的研究方法6Ka好牙网

　　鉴定LB的方法有多种选择，较早的方法是利用选择性培养基分离纯化鉴定LB的类型。另外，还可以在基因水平上鉴定LB种类，而鉴别LB特异菌株或特异基因型的分子生物学手段包括随机引物聚合酶链反应(arbitrarily primed polymerase chain reaction，AP-PCR)、变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE)、16SrRNA基因序列分析，用PCR结合限制酶切片段多态性分析(chromosomal DNA finger printing，CDF)，核糖体基因分型、脉冲场凝胶电泳和重复性酶切片段分析等方法，其中以PCR为基础的DNA指纹技术可以从基因水平对LB的整体基因型进行检测，甚至可以进行菌株高度特异性的鉴定。而在这几年广泛应用发展的二代测序技术(The next gene ration sequencing technology，NGS)也极大的推动了微生物研究分析的发展。AP-PCR是一种通过随意设计或选择一个非特异性引物对在未知的目的基因序列模板进行扩增的技术。6Ka好牙网

　　根据Walter等的研究报道，LB的AP-PCR引物为上游引物(Lac1)和下游引物(Lac2)筛选扩增的LB的16SrRNA基因片段，同时1个大小为40bp的GC发夹结构(5′-GCCCGGGGCGCGCCCCGGGCGGCCCGGGGGCACCGGGGG-′)连接在下游引物(Lac2)上，扩增出下一步适合DGGE电泳分析的PCR产物。DGGE技术在一般的聚丙烯酰胺凝胶基础上，加入了变性剂梯度，从而能够把同样长度但序列不同的DNA片段区分开来。特定的DNA片段有其特有的序列组成，其序列组成决定了其解链区域和解链行为。NGS主要包括了454FLX、Illumina和Applied Biosystems SOLID system等技术平台。6Ka好牙网

　　2016年Rôças等通过16SrRNA基因测序对10个不可复性牙髓炎的牙本质深龋坏样本进行分析，发现在属水平上，LB属约占菌群的42.3%，S.mutans约占5.5%，这也提示LB属与不可复性牙髓炎的发生密切相关。6Ka好牙网

　　五、母亲与儿童龋病关系的研究现状6Ka好牙网

　　早期龋病的致病菌来源除了食物、胃肠道还有其他感染人群的传播。有研究证据表明在中国或巴西的一些幼儿园的儿童间存在水平传播。2012年Teanpaisan等通过研究泰国181对母亲-儿童口腔S.mutans和LB的基因型分布，发现儿童口腔S.mutans和LB水平与母亲显著相关，而母亲-儿童口腔S.mutans和LB的基因型相同率分别为76%和50%，提出母亲与儿童之间存在着垂直传播关系。Caufield等通过研究15对母亲-儿童口腔LB基因型，发现只有23%的组具有相同的基因型，提出LB基因型相同的原因不仅是由于存在母子间垂直传播，也有可能通过相似的食物摄入。6Ka好牙网

　　六、结论6Ka好牙网

　　我国的5~12岁儿童患龋率还是偏高，口腔内的致龋菌群包括了S.mutans、LB和放线菌属等。那么LB作为一种口腔内长期且大量存在的细菌，既能够与链球菌一起协同致龋，又可通过分泌抑菌物质来抑制其他细菌的生长。对于LB的研究也逐渐的进入到基因分子水平，利用AP-PCR、CDF和DGGE技术通过对LB的16SrRNA基因片段的特异性分析，对口腔内LB的基因型进行特异性分析。6Ka好牙网

　　七、展望6Ka好牙网

　　LB在儿童龋齿发展中起重要作用，而龋病的发生又与儿童的饮食习惯、口腔卫生有极大的关系。虽然有个别的研究发现3~6岁的儿童与其母亲口腔内的LB基因型有一定的相关性，但是这些研究覆盖面不广，且也只描述了其相关性，而且国内研究甚为少见。因此，本文认为下一步应该在基因水平上对患龋儿童及其母亲口腔内LB种类的研究，另一方面也可进一步证明母亲与患龋儿童之间的垂直传播关系。6Ka好牙网